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Procédure d’isolement

Les pancréas sont obtenus à partir de donneurs PMO (prélèvements multi-organes) en état de mort cérébrale. Les pancréas sont prélevés et acheminés rapidement au centre isolateur de Montpellier dans le respect du délai d’ischémie froide (12h maximum). La procédure d’isolement débute dès réception du pancréas par l’équipe et dure entre 8h et 10h :

Le pancréas est correctement disséqué puis infusé par le canal pancréatique avec de la collagénase (enzyme de digestion) à 4°C. Le pancréas est ensuite placé dans une chambre de digestion (chambre de Ricordi) intégrée à un circuit de digestion fermé et chauffé à 37°C. Cette étape de digestion qui dure entre 20 et 30min permettra de digérer la partie exocrine du pancréas et de garder intact les îlots de Langerhans (partie endocrine). Au cours de cette étape cruciale, des échantillons sont régulièrement prélevés et observés au stéréomicroscope afin d’évaluer la qualité de la digestion et d’appréhender au mieux l’arrêt de cette étape, c’est-à-dire le moment où les îlots sont clairement dissociés du tissus exocrine. La prolongation de la digestion conduirait rapidement à abimer la structure des îlots de Langerhans et ainsi altérer leur fonction. L’activité de digestion par la collagénase est stoppée par dilution à 4°C.

La deuxième étape majeure de la procédure consiste à purifier les îlots de Langerhans du reste du tissu exocrine. Les îlots ayant une densité plus faible que la partie exocrine, ils sont donc séparés à l’aide d’un gradient de densité et par centrifugation (centrifugeuse COBE). Les îlots purs sont ensuite comptés, puis mis en culture dans un milieu adapté. Pour chaque procédure, la pureté, la viabilité ainsi que la fonction des îlots pancréatiques sont évaluées. De même, plusieurs tests microbiologiques sont réalisés au cours de la procédure.

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Projets de Recherche

Le LTCD développe une recherche visant à améliorer l’isolement, la survie et la fonction sécrétrice des îlots pancréatiques humains afin de travailler à l’amélioration de l’efficacité des greffes.

Les projets de recherche plus fondamentale actuellement menés au laboratoire s’intéressent notamment à l’impact de la variabilité glycémique présente chez certains patients diabétiques sur la masse fonctionnelle des cellules β, au rôle de l’immuno-protéasome dans la régulation de la fonction des îlots humaine mais également à l’effet des cellules stromales pancréatiques immortalisées humaines sur la fonction et la survie des cellules β.